Nib óolal ikil a xíimbaltik nature.com. Le versión navegador ku meyajtiko' yaan jump'éel áantaj CSS limitado. Utia'al u ma'alo'obtal, k recomienda utilizar le ts'ook versión le navegador (wa tu'upul modo compatibilidad ti' Internet Explorer). Beyxan, uti'al u yantal áantaj, le ts'ono'oto' ma' yaan u táakbesik estilos mix JavaScript.
Le sulfuro de hidrógeno (H2S) yaan ti' ya'abkach táanil fisiológicos yéetel patológicos ti' u wíinkilal ch'íijsajil. Le hidrosulfuro sodio (NaHS) jach ampliamente utilizado bey juntúul nu'ukula' farmacológica utia'al u evaluar le táanil H2S ti' experimentos biológicos. Kex u sa'atal H2S ti' le soluciones NaHS ku bisik chéen jump'éel minutos, le soluciones NaHS séen sido utilizadas bey compuestos donantes utia'al u H2S ti' ja' potable ti' yaan xook ba'alche'ob. Le xooko' tu xak'altaj wa ja' yuk'ul yéetel jump'éel concentración NaHS 30 μM preparada ti' chúujo'ob rata leti' ch'o' je'el u páajtal u permanecer estable ichil Ba'axten lo bey 12-24 horas, bey sugirió tumen yaan autores. Preparar jump'éel solución NaHS (30 μM) ti' ja' potable yéetel inmediatamente verter ti' chúujo'ob ja' rata leti' ch'o'. Le muestras bino'ob recogidas ti' le xnuk yéetel u interior le botella ja' ti' 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12 yéetel 24 horas utia'al u P'iis le contenido sulfuro utilizando le método azul metileno. Beyxan, le ratas masculinas yéetel femeninas bino'ob inyectadas yéetel NaHS (30 μM) ichil ka'ap'éel semanas yéetel le concentraciones sulfuro sérico bino'ob P'iis Amal ka'ap'éel k'iino'ob ichil le yáax semana yéetel tu xuul le segunda semana. Le solución NaHS ti' le muestra obtenida ti' u xnuk le botella ja' ka'ach inestable; tu yéemel 72% yéetel 75% ka' 12 yéetel 24 horas, respectivamente. Ti' le muestras obtenidas ti' le interior le chúujo'ob ja', le disminución ti' NaHS ma' bin significativa ichil 2 horas; ba'ale', tu yéemel 47% yéetel 72% ka' 12 yéetel 24 horas, respectivamente. Le inyección NaHS ma' tu beetaj loob ti' le nivel sulfuro sérico ti' le ratas masculinas yéetel femeninas. Tu ts'ooke', le soluciones NaHS preparadas yéetel ja' potable ma' k'a'abéet utilizar u utia'al u donación H2S tuméen le solución jach inestable. Le bejo' administración yaan u exponer ba'alche'ob ti' yaan xan ya'abach irregulares yéetel asab mejen u le esperadas u NaHS.
Le sulfuro de hidrógeno (H2S) ts'o'ok u meyaj bey toxina tak 1700; kex beyo', u páajtal u meyaj bey jump'éel molécula bioseñalización endógena bin descrito tumen Abe yéetel Kimura ti' 1996. Ichil le ts'ook óoxp'éel décadas, numerosas noj H2S ti' jejeláas sistemas humanos séen sido elucidadas, conduciendo ti' le realización u le moléculas donantes H2S páajtal yaantal aplicaciones clínicas ti' le Ts'a'akal wa gestión ciertas k'aas k'oja'anilo'obo'; ilawil Chirino et al. uti'al jump'éel revisión reciente.
Hidrosulfuro sodio (NaHS) ts'o'ok sido ampliamente utilizado bey juntúul nu'ukula' farmacológica utia'al u evaluar le táanil H2S ti' ya'ab cultivos celulares yéetel xook ba'alche'ob5,6,7,8. Ba'ale', NaHS ma' leti' jump'éel donante H2S ideal tuméen ku sutk'esiko'ob jáan ti' H2S leti' HS- ti' solución, ku contamina uchik yéetel polisulfuros, ka uchik u oxida yéetel volatiliza4,9. Ti' ya'ab experimentos biológicos, NaHS ku disuelve ichil ja', ts'áaik tumen resultado volatilización pasiva yéetel asab H2S10,11,12, oxidación espontánea ti' H2S11,12,13, yéetel fotolisis14. Le sulfuro ti' le solución áantajil ku sa'atal jach jáan tuméen le volatilización H2S11. Ti' jump'éel nu'ukul je'ek'ab, u chúumuk kuxtal (t1/2) u H2S yaan kex 5 minutos, yéetel u concentración ku yéemel yan 13% tumen minuto10. Kex u sa'atal sulfuro de hidrógeno ti' le soluciones NaHS ku bisik chéen jump'éel minutos, yaan xook ba'alche'ob ts'o'ok u utilizado soluciones NaHS bey fuente sulfuro hidrógeno ti' ja' potable ichil 1-21 semanas, reemplazando le solución ku taasik NaHS Amal 12-24 horas le meyajo' ma' táan u bin yéetel le principios ti' le investigación científica, ts'o'ok u le dosis fármacos k'a'abéet u basadas ti' u búukinta'al ti' uláak' especies, especialmente humanos.27
Le investigación preclínica ti' biomedicina u k'áat u ma'alo'obkíinsiko'ob u ma'alobil le kanáanil k'oja'ano'ob wa le resultados Ts'a'akal. Ba'ale', u ya'ala'al máaxo'ob máano'ob óol tuláakal le máasewáalo'obo' u xook ba'alche'ob láayli' ma' u traducido ti' humanos28,29,30. Juntúul le razones utia'al u fracaso le traducción jach u si'ipil óolal ti' le ma'alobil metodológica ti' le xook ba'alche'ob30. Le o'olale', u tuukulil le xooko' leti' u xak'altik wa 30 μM soluciones NaHS preparadas ti' chúujo'ob ja' rata leti' ch'o' je'el u páajtal u permanecer estables ti' ja' potable ichil 12-24 h, bey afirmado wa sugirió ti' yaan xook.
Tuláakal le experimentos ti' le xooko' u realizaron de acuerdo con le directrices publicadas utia'al u kanáanil yéetel búukinta'al ba'alche'ob laboratorio ti' Iran31. Tuláakal le informes experimentales ti' le xooko' xan siguieron le directrices ARRIVE32. Le Comité Ético ti' le Instituto u Ciencias Endocrinas, Universidad Shahid Beheshti u Ciencias Médicas, aprobó tuláakal le procedimientos experimentales ti' le xooko'.
Acetato de zinc dihidrato (CAS: 5970-45-6) yéetel cloruro férrico anhidro (CAS: 7705-08-0) bino'ob adquiridos ti' Biochem, Chemopahrama (Cosne-sur-Loire, Francia). Hidrato u hidrosulfuro sodio (CAS: 207683-19-0) yéetel N, N-dimetil-p-fenilediamina (DMPD) (CAS: 535-47-0) bino'ob adquiridos ti' Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Isoflurano bin u ma'anal ti' Piramal (Bethlehem, PA, USA). Le ácido clorhídrico (HCl) bin u adquirido ti' Merck (Darmstadt, Alemania).
Preparar jump'éel solución NaHS (30 μM) ti' ja' potable yéetel inmediatamente verter ti' le chúujo'ob ja' rata leti' ch'o'. Le concentracióna' yéeya'ab tu yo'olal ya'abkach publicaciones ku meyajtiko'ob NaHS bey fuente H2S; ilawil le jaats tsikbal. NaHS jump'éel molécula hidratada je'el u páajtal u yaantal jejeláas yaan xan ya'abach ja' ti' hidratación (je'ebix, NaHS•xH2O); je'el bix u ya'alik le fabricante, le porcentaje NaHS utilizado ti' k xook bin 70.7% (es decir, NaHS•1.3 H2O), ka tu ch'a'aj le je'o' tu yilaje' ti' k cálculos, tu'ux utilizamos jump'éel peso molecular u 56.06 g leti' mol, ba'ax le le peso molecular u NaHS anhidro. Ja' ti' hidratación (xan k'aaba' ja' ti' cristalización) leti' le moléculas ja' ku beetiko'ob le ba'ax cristalina33. Le hidratos yaan ti'ob jejeláas propiedades físicas yéetel termodinámicas ti' comparación yéetel le anhidratos34.
Táanil ti' u ts'áabal NaHS ti' le ja'o', P'iis u pH yéetel u temperatura le disolvente. Tu séeba'anil verter le solución NaHS ti' le botella ja' rata leti' ch'o' ti' le jaula ba'alche'o'. Le muestras bino'ob recogidas tak le xnuk yéetel tak ichil le botella ja' ti' 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, yéetel 24 h utia'al u P'iis le contenido sulfuro. Le mediciones sulfuro bino'ob tomadas inmediatamente ka' Amal muestreo. K obtuvimos muestras u xnuk le tubo tuméen yaan xook ts'o'ok u demostrado u le chan Buka'aj poro le tubo ja' je'el u páajtal u minimizar le evaporación H2S15,19. Le talamila' ku chíikpajal xan ti' le solución yaan te' botellao'. Ba'ale', ma' bey úuchik ti' le solución yaan tu kaal le botella ja'o', ba'ax yaan ka'ach jump'éel tasa evaporación asab ka'anal yéetel ka'ach autoxidante; u jaajile', le ba'alche'obo' tu yuk'o'ob le ja'a' yáax.
Ti' le xooko' meyajnaj ratas Wistar xiibo'ob yéetel ko'olelo'ob. Le ch'o'obo' bino'ob alojados ti' jaulas polipropileno (2-3 ch'o'obo' tumen jaula) yáanal condiciones estándar (temperatura 21-26 ° C, humedad 32-40%) yéetel 12 h sáasil (7 u sáastal u 7 u yáak'abtal) yéetel 12 h u éek'joch'e'enil (7 u sáastal u 7 u sáastal). Le ch'o'obo' yaan ka'ach ti'ob ja' ti' le grifo yéetel bino'ob alimentados yéetel chow estándar (Khorak Dam Pars Company, Teherán, Irán). Ratas Wistar (6 wi'inal) ko'olelo'ob (n=10, peso corporal: 190-230 g) yéetel xiib (n=10, peso corporal: 320-370 g) bino'ob divididos aleatoriamente ti' múuch' meyajo'ob yéetel NaHS (30 μM) tratados (n=5 tumen múuch'). Utia'al u yila'al u nojchil le muestra, utilizamos le enfoque KISS (Keep It Simple, Stupid), ku combina yaan anterior yéetel análisis u páajtalil35. Yáax k meentik jump'éel xook piloto ti' 3 ratas ka determinamos le nivel promedio u sulfuro total ti' suero yéetel le desviación estándar (8.1 ± 0.81 μM). Tu láak', considerando 80% u páajtalil yéetel asumiendo jump'éel nivel significación 5% ka'ap'éel caras, determinamos jump'éel Buka'aj muestra preliminar (n = 5 basado ti' literatura anterior) ku correspondió ti' jump'éel Buka'aj efecto estandarizado u 2.02 yéetel le je'o' predefinido sugerido tumen Festing utia'al u cálculo le Buka'aj muestra ba'alche'ob experimentales35. Ka' u ya'abtal le je'ela' tumen le SD (2.02 × 0.81), le Buka'aj efecto detectable predicho (1.6 μM) bin 20%, ba'ax le aceptable. Lela' u k'áat u ya'ale' n = 5/múuch' jach suficiente utia'al u detectar jump'éel k'eexpajal promedio 20% ichil múuch'. Le ch'o'obo' bino'ob divididas aleatoriamente ti' múuch' kaambalil yo'osal yéetel NaSH-tratados utilizando le función aleatoria ti' le software Excel 36 (Fig. 1 suplementaria). Le ceguerao' beeta'ab tu nivelil resultado, yéetel le investigadores ku beetiko'ob le mediciones bioquímicas ma' u yojelo'ob ka'ach le asignaciones múuch'.
Le múuch' NaHS ti' ka'ap'éel sexos bino'ob tratados yéetel 30 μM solución NaHS preparada ti' ja' potable ichil 2 semanas; Ku ts'aik jump'éel túumben solución Amal 24 h, ichil le k'iin ku p'iis u peso u wíinkilal. Le muestras k'i'ik'el bino'ob recogidas ti' le puntas u nej tuláakal le ratas yáanal anestesia isoflurano Amal ka'ap'éel k'iino'ob tu xuul le yáax yéetel segunda semanas. Le muestras k'i'ik'el bino'ob centrifugadas ti' 3000 g ichil 10 min, le suero bin separado yéetel almacenado ti' –80 ° C utia'al u posterior medición u urea sérica, creatinina (Cr), yéetel sulfuro total. Le urea sérica bin determinada tumen método ureasa enzimática, yéetel le creatinina sérica bin determinada tumen método fotométrico Jaffe utilizando kits comercialmente disponibles (Man Company, Teherán, Irán) yéetel juntúul analizador automático (Selectra E, meyaj ku serie 0-2124, Países Bajos). Le coeficientes intra- yéetel interensayo u variación utia'al u urea yéetel Cr bino'ob menos u 2.5 ti chúumuk.
Le método azul metileno (MB) ku meyajtiko'ob utia'al P'iis le sulfuro total ti' ja' potable yéetel suero ku taasik NaHS; MB leti' le método asab comúnmente utilizado utia'al u P'iis le sulfuro ti' soluciones u granel yéetel muestras biológicas11,37. Le método MB je'el u páajtal u utilizado utia'al u estimar le pool sulfuro total38 yéetel P'iis sulfuros inorgánicos ti' bix u H2S, HS- yéetel S2 ti' le fase acuosa39. Ti' le método, le azufre ku precipita bey sulfuro zinc (ZnS) tu taan acetato zinc11,38. Le precipitación acetato zinc jach le método asab ampliamente utilizado utia'al u separar sulfuros uláak' cromóforos11. ZnS bin u ka'a disuelto utilizando HCl11 yáanal condiciones fuertemente ácidas. Le sulfuro ku reaccionar yéetel DMPD ti' jump'éel relación estequiométrica u 1:2 ti' jump'éel reacción catalizada tumen cloruro férrico (Fe3 + actúa bey juntúul aj nu'uktaj oxidante) utia'al u formar le tinte MB, ku detecta espectrofotométricamente ti' 670 nm40,41. U xuul u yila'al le método MB jach yan 1 μM11.
Te' xook je'ela', 100 μL ti' Amal muestra (solución wa suero) ku ts'áabal ti' jump'éel tubo; tu láak' 200 μL u acetato u zinc (1% p/v ti' ja' destilada), 100 μL u DMPD (20 mM ti' 7.2 M HCl), yéetel 133 μL u FeCl3 (30 mM ti' 1.2 M HCl) ku añadieron. Le mezclao' ku incubarta'al ti' 37°C te' éek'joch'e'enil ichil 30 min. Le solución bin u centrifugada ti' 10.000 g ichil 10 min, ka le absorción le sobrenadante bin u xook ti' 670 nm utilizando jump'éel lector microplacas (BioTek, MQX2000R2, Winooski, VT, USA). Le concentraciones sulfuro bino'ob determinadas utilizando jump'éel curva calibración u NaHS (0-100 μM) ti' ddH2O (Fig. 2 suplementaria). Tuláakal le soluciones utilizadas utia'al le mediciones bino'ob recién preparadas. Le coeficientes intra- yéetel interensayo u variación utia'al u mediciones sulfuro bino'ob 2.8 ti chúumuk yéetel 3.4 ti chúumuk, respectivamente. Xan determinamos le sulfuro total recuperado ti' le muestras ja' potable yéetel suero ku ya'alik tiosulfato sodio utilizando le método muestra fortificada42. Le recuperaciones utia'al u muestras ja' potable yéetel suero ku ya'alik tiosulfato sodio bino'ob 91 ± 1.1% (n = 6) yéetel 93 ± 2.4% (n = 6), respectivamente.
U xak'alil estadístico beeta'ab yéetel GraphPad Prism software versión 8.0.2 uti'al Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, USA, www.graphpad.com). Utilizó jump'éel t-test emparejado utia'al u comparar le temperatura yéetel le pH le ja'o' potable bey ma' yéetel ka' u adición NaHS. Le asab H2S ti' le solución ku taasik NaHS bin calculada bey jump'éel disminución porcentual ti' le absorción línea base, ka utia'al u evaluar wa le asab ka'ach estadísticamente significativa, realizamos jump'éel ANOVA unidireccional repetidas-medidas seguida tumen le prueba comparación múltiple u Dunnett. Peso corporal, urea sérica, creatinina sérica, yéetel sulfuro sérico total ichil le k'iin bino'ob comparados ichil ratas kanik yéetel NaHS-tratadas u jejeláas sexos utilizando jump'éel ANOVA ka'ap'éel vías mixtas (ichil-ichil) seguido tumen juntúul prueba post hoc u Bonferroni. Le valores P u ka'ap'éel colas < 0.05 bino'ob considerados estadísticamente significativos.
U pH le ja'o' yuk'ul ka'ach 7.60 ± 0.01 bey ma' u ts'áabal NaHS yéetel 7.71 ± 0.03 ka' u ts'áabal NaHS (n = 13, p = 0.0029). U yooxol le ja'o' yuk'ul 26.5 ± 0.2 ka'aj yéemel tak 26.2 ± 0.2 ka' u ts'áabal NaHS (n = 13, p = 0.0128). Preparar 30 μM solución NaHS ti' ja' potable yéetel almacenar ti' jump'éel botella ja'. Le solución NaHS jach inestable yéetel u concentración disminuye yéetel le k'iin. Le ken u ch'a'abal le muestra ti' u kaal le botella ja'o', jump'éel disminución significativa (68.0%) bin u observada ichil le yáax p'isib, ka le contenido NaHS ti' le solución disminuyó ti' 72% yéetel 75% ka' 12 yéetel 24 horas, respectivamente. Ti' le muestras obtenidas ti' chúujo'ob ja', le reducción ti' NaHS ma' bin significativa tak 2 horas, ba'ale' ka' 12 yéetel 24 horas había disminuido ti' le 47% yéetel 72%, respectivamente. Le k'iino'oba' datos indican u le porcentaje NaHS ti' jump'éel solución 30 μM preparada ti' ja' potable había disminuido u yan jump'éel cuarta parte ti' le je'o' inicial ka' 24 horas, independientemente ti' le tu'ux ku yaantal le muestreo (yoochel 1).
Estabilidad u solución NaHS (30 μM) ti' ja' potable ti' chúujo'ob rata leti' ch'o'. Ka' u preparación le solución, muestras bino'ob tomadas ti' le xnuk yéetel u interior le botella ja'. Le datos ku ye'esa'al bey promedio ± SD (n = 6 leti' múuch'). * yéetel #, P < 0.05 ti' comparación yéetel le k'iin 0. Le oochelo' le botella ja' ye'esik u xnuk (yéetel apertura) yéetel u wíinkilal le botella. U volumen le xnuk jach yan 740 μL.
Le concentración NaHS ti' le solución 30 μM recién preparada bin 30.3 ± 0.4 μM (rango: 28.7-31.9 μM, n = 12). Ba'ale', ka' 24 h, le concentración NaHS disminuyó ti' jump'éel je'o' asab t'okik (medio: 3.0 ± 0.6 μM). Bix u ye'esik ti' le yoochel 2, le concentraciones NaHS ti' le ku le ratas bino'ob expuestas ma' bino'ob constantes ichil le período xook.
U aalil u wíinklil le ratas hembras aumentó significativamente yéetel le k'iin (u 205.2 ± 5.2 g u 213.8 ± 7.0 g ti' le múuch' kaambalil yo'osal yéetel u 204.0 ± 8.6 g u 211.8 ± 7.5 g ti' le múuch' tratado yéetel NaHS); kex beyo', le Ts'a'akal NaHS mina'an ka'ach mix jump'éel efecto ti' u peso corporal (Fig. 3). U aalil u wíinklil le ratas xiibo'obo' aumentó significativamente yéetel le k'iin (u 338.6 ± 8.3 g u 352.4 ± 6.0 g ti' le múuch' kaambalil yo'osal yéetel u 352.4 ± 5.9 g u 363.2 ± 4.3 g ti' le múuch' tratado yéetel NaHS); kex beyo', le Ts'a'akal NaHS mina'an ka'ach mix jump'éel efecto ti' u peso corporal (Fig. 3).
K'eexpajal ti' u peso u wíinkilal ti' ratas hembras yéetel machos ka' u ts'a'abal NaHS (30 μM). Le datos ku presentan bey promedio ± SEM yéetel u compararon utilizando análisis mixto (ichil-ichil) u ka'ap'éel vías u varianza yéetel prueba post hoc u Bonferroni. n = 5 ti' Amal sexo ti' Amal múuch'.
Le concentración urea yéetel creatina fosfato ti' suero bino'ob comparables ti' le ratas kanik yéetel NaSH-tratadas ichil le xooko'. Beyxan, le Ts'a'akal NaSH ma' tu beetaj loob ti' le concentraciones urea yéetel creatinecromo ti' suero (tabla 1).
Le concentraciones sulfuro total ti' suero u línea base bino'ob comparables ichil le kaambalil yo'osal yéetel NaHS-tratados macho (8.1 ± 0.5 μM leti' 9.3 ± 0.2 μM) yéetel hembra (9.1 ± 1.0 μM leti' 6.1 ± 1.1 μM) ratas. U ts'a'abal NaHS ichil 14 k'iino'ob mina'an mix jump'éel efecto ti' le niveles sulfuro total ti' suero ti' ratas masculinas wa femeninas (Fig. 4).
K'eexpajal ti' le concentración sulfuro total ti' suero ti' ratas masculinas yéetel femeninas ka' u administración NaHS (30 μM). Le datos ku presentan bey promedio ± SEM yéetel u compararon utilizando jump'éel análisis mixto (ichil-ichil) u ka'ap'éel vías u varianza yéetel prueba post hoc u Bonferroni. Amal sexo, n = 5/múuch'.
U noj ba'alil le xooko' leti'e' u yuk'ik ja' ku taasik NaHS jach inestable: chéen yan jump'éel cuarta parte ti' le contenido sulfuro total inicial je'el u páajtal u detectado 24 horas ka' u muestreo tak le xnuk yéetel ichil le chúujo'ob ja' rata leti' ch'o'. Beyxan, le ratas bino'ob expuestas ti' concentraciones inestables u NaHS debido a le asab H2S ti' le solución NaHS, ka le adición NaHS ti' le ja'o' potable ma' afectó u peso corporal, urea sérica yéetel cromo creatina, wa sulfuro sérico total.
Te' xook je'ela', u tasa u sa'atal H2S ti' 30 μM soluciones NaHS preparadas ti' ja' potable bin yan 3% tumen p'isib. Ti' jump'éel solución tamponada (100 μM sulfuro sodio ti' 10 mM PBS, pH 7.4), le concentración sulfuro bin u informada u disminuir ti' le 7 ti chúumuk ichil le k'iin yóok'ol 8 h11. Ts'o'ok k defendido ka'ache' le administración intraperitoneal ti' NaHS tumen informar u le tasa asab sulfuro ti' jump'éel solución NaHS 54 μM ti' ja' potable bin yan 2.3% tumen p'isib (4% leti' p'isib ti' le yáax 12 h yéetel 1.4% leti' p'isib ti' le ts'ook 12 h ka' u preparación)8. Xook anteriores43 tu kaxtaj jump'éel asab constante u H2S u soluciones NaHS, chuunil laat'a'an debido a le volatilización yéetel oxidación. Kex ma' u ts'a'abal burbujas, le sulfuro ti' le solución stock ku sa'atal jáan debido a le volatilización H2S11. Xook ts'o'ok u demostrado u ichil le tuukula' dilución, ku bisik yan 30-60 segundos, yan 5-10% u H2S ku sa'atal debido a le evaporación6. Utia'al Jech u evaporación H2S ti' le solución, le investigadores séen ch'a'abal Jayp'éel ba'axo'ob tu kano'ob, incluyendo agitación O'olkij ti' le solución12, pixik le solución stock yéetel cha'ano' plástico6, ka minimizar le exposición le solución ti' le iik'o', ts'o'ok u le tasa evaporación H2S yaantal yo'osal u le interfaz iik'-líquido iones, especialmente hierro férrico, ku impurezas ti' le ja'o'.13 Oxidación H2S resulta ti' le formación polisulfuros (átomos azufre vinculados tumen enlaces covalentes)11. Utia'al Jech u oxidación, soluciones ku ya'alik H2S ku preparan ti' disolventes desoxigenados44,45 ka tu láak' purgadas yéetel argón wa nitrógeno ichil 20-30 min utia'al u asegurar le desoxigenación.11,12,37,44,45,46 Le ácido dietilentriaminpentaacético (DTPA) leti' jump'éel chelator metal (MHS-44) autoxidación ti' soluciones aeróbicas. Wa mina'an DTPA, le tasa autoxidación HS- jach yan 50% yóok'ol yan 3 h ti' 25 ° C37,47. Beyxan, ts'o'ok u le oxidación 1e-sulfuro jach catalizada tumen le sáasilo' ultravioleta, le solución k'a'ana'an u almacenada ti' hielo yéetel protegida ti' le sáasilo'11.
Bix u ye'esik ti' le yoochel 5, NaHS ku disocia ti' Na + yéetel HS-6 ken u disuelve ichil ja'; le disociación ku determina tumen le pK1 ti' le reacción, ku dependiente ti' le temperatura: pK1 = 3.122 + 1132 leti' T, tu'ux T oscila ichil 5 u 30 ° C yéetel u p'iss bey ti' grados Kelvin (K), K = ° C + 273.1548. HS- yaan ti' jump'éel ka'anal pK2 (pK2 = 19), bey u ti' pH < 96.49, S2- ma' u forma wa u forma ti' jach mejen yaan xan ya'abach. U jela'anil, HS- ku meyaj bey jump'éel k'oja'ano'obo' yéetel ku k'amik H+ ti' jump'éel molécula H2O, yéetel H2O ku meyaj bey jump'éel ácido yéetel ku sutk'esiko'ob ti' H2S yéetel OH-.
U beeta'al gas H2S disuelto ti' solución NaHS (30 μM). aq, solución acuosa; g, gas; l, líquido. Tuláakal le cálculos ku tukliko'obe' u pH le ja'o' = 7.0 yéetel u temperatura le ja'o' = 20 °C. beeta'an yéetel BioRender.com.
Kex yaan ba'ax ku ya'alik le soluciones NaHS ku inestables, ya'ab xook ba'alche'ob ts'o'ok u utilizado soluciones NaHS ti' ja' potable bey juntúul compuesto donante H2S15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26 yéetel duraciones intervención ku bino'ob tak 1 u 21 semanas (tabla 2). ichil le xooko'oba', le solución NaHS bin u renovada Amal 12 h, 15, 17, 18, 24, 25 h wa 24 h, 19, 20, 21, 22, 23 h. K ya'ala'al máaxo'ob máano'ob mostraron u le ratas bino'ob expuestas ti' concentraciones fármacos inestables debido a le asab H2S ti' le solución NaHS, yéetel le contenido NaHS ti' le ja'o' potable ti' le ratas fluctuó significativamente ichil 12 wa 24 h (wil wíimbala' 2). Ka'atúul ti' le k'iino'oba' xook informaron u le niveles H2S ti' le ja'o' permanecieron estables ichil 24 h22 wa u chéen 2-3% pérdidas H2S bino'ob observadas ichil 12 h15, ba'ale' ma' proporcionaron datos áantajil wa detalles medición. Ka'ap'éel xook ts'o'ok u ye'esik u le chan metros le chúujo'ob ja' je'el u páajtal u minimizar le evaporación H2S15,19. Ba'ale', k ya'ala'al máaxo'ob máano'ob mostraron u le ba'ala' chéen je'el u páajtal u retrasar le asab H2S ti' jump'éel botella ja' tumen 2 h kúuchil 12-24 h. Tu ka'ap'éelal xook ku ya'aliko'obe' k tukultike' le nivel NaHS ti' le ja'o' yuk'ul ma' k'expajal tumen ma' k ilik jump'éel k'eexpajal u boonil ti' le ja'o'; le beetike', u oxidación H2S tumen iik' ma' bin significativa19,20. Jach sorprendentemente, le método subjetivo evalúa le estabilidad NaHS ichil ja' kúuchil P'iis le k'eexpajal ti' u concentración ichil le k'iin.
U sa'atal H2S ti' solución NaHS yaan ba'al u yil yéetel pH yéetel temperatura. Bix u ya'ala'al ti' k xook, u disolver NaHS ichil ja' resulta ti' le formación jump'éel solución alcalina50. Le ken u NaHS u disuelve ichil ja', le formación gas H2S disuelto yaantal yo'osal u le pH value6. Cuanto menor le pH le solución, asab nojoch le proporción NaHS presente bey moléculas gas H2S yéetel asab sulfuro ku sa'atal ti' le solución acuosa11. Mix juntúul ti' le xooko'oba' tu ya'alaj u pH le ja'o' yuk'ul ku meyaj bey disolvente uti'al NaHS. Je'el bix u ya'alik le recomendaciones ti' le OMS, ku adoptan tumen óol tuláakal le máasewáalo'obo' ti' le noj lu'umilo'obo', le pH le ja'o' potable k'a'ana'an yaantal ti' le rango 6.5-8.551. Ti' le rango pH, le tasa oxidación espontánea ti' H2S aumenta yan tenfold13. U disolver NaHS ichil ja' ti' le rango pH resultará ti' jump'éel concentración gas H2S disuelto u 1 u 22.5 μM, ku enfatiza u k'a'ana'an u monitoreo le pH le ja'o' bey ma' disolver NaHS. Beyxan, le rango temperatura reportado ti' le xooko' anterior (18-26 ° C) resultaría ti' jump'éel k'eexpajal ti' le concentración gas H2S disuelto ti' le solución yan 10 ti chúumuk, ts'o'ok u le cambios temperatura alteran pK1, ka mejen cambios ti' pK1 páajtal yaantal jump'éel impacto significativo ti' le concentración gas H2S disuelto48. Beyxan, u chowakil u xáantal yaan xook (5 wi'inal)22, ichil le ba'ax ku pa'ta'al u nojoch variabilidad temperatura, xan exacerba le talamilo'.
Tuláakal le xooko'ob excepto one21 utilizaron 30 μM solución NaHS ti' ja' potable. Utia'al u tsolik le dosis utilizada (es decir 30 μM), yaan autores señalaron u NaHS ti' le fase acuosa produce exactamente le bak'paach concentración gas H2S yéetel u le rango fisiológico u H2S jach 10 u 100 μM, bey u le dosis táan ichil le rango fisiológico15,16. Yaan máax tu tsolaj 30 μM NaHS je'el u páajtal u mantener le nivel H2S ti' plasma ichil le rango fisiológico, es decir 5-300 μM19,20. K consideramos le concentración NaHS ti' ja' u 30 μM (pH = 7.0, T = 20 ° C), ku bin utilizado ti' yaan xook utia'al u xook le táanil H2S. Je'el u páajtal k calcular u le concentración gas H2S disuelto jach 14.7 μM, ba'ax le yan 50% ti' le concentración NaHS inicial. Le je'ela' bey je'ex le je'o' calculado tumen uláak' autores yáanal le bak'paach condiciones13,48.
Ti' k xook, u ts'a'abal NaHS ma' tu k'exaj u aalil u wíinklil; le resultadoa' ku bin yéetel u resultadoil uláak' xook ti' ch'o'obo' masculinos22,23 yéetel rats masculinos18; Ba'ale', ka'ap'éel xook tu ya'alajo'ob u NaSH restaurado le disminución peso corporal ti' ratas nefrectomizadas24,26, ka' jo'op' u uláak' xook ma' informaron le efecto le administración NaSH ti' le peso corporal15,16,17,19,20,21,25. Beyxan, ti' k xook, u ts'a'abal NaSH ma' tu beetaj loob ti' le niveles urea yéetel cromo creatina ti' suero, ba'ax le consistente yéetel ya'ala'al máaxo'ob máano'ob uláak' informe25.
Le xooko' tu kaxtaj u ts'áabal NaHS ti' ja' potable ichil 2 semanas ma' afectó le concentraciones totales u sulfuro sérico ti' ratas masculinas yéetel femeninas. Le ba'ax ku kaxta'ala' ku bin tu paach le ba'ax tu ya'alaj Sen et al. (16): 8 semanas u Ts'a'akal yéetel 30 μM NaHS ti' ja' potable ma' afectó le niveles sulfuro plasmático ti' ratas kanik; kex beyo', tu ya'alajo'obe' le intervencióna' tu ka'a ts'áaj le disminución ti' le niveles H2S ti' plasma ch'o'obo' nefrectomizados. Li yéetel u láak'o'ob. (22) xan informó u Ts'a'akal yéetel 30 μM NaHS ti' ja' potable ichil 5 wi'inal aumentó le niveles sulfuro libre plasma ti' ch'o'obo' envejecidos tumen yan 26 ti chúumuk. Uláak' xook ma' u ya'aliko'ob cambios ti' le sulfuro circulante ka' u ts'áabal NaHS ti' le ja'o' potable.
Siete xook tu ya'alajo'ob u búukinta'al Sigma NaHS15,16,19,20,21,22,23 ba'ale' ma' tu ts'áajo'ob asab detalles yóok'ol le ja'o' hidratación, yéetel jo'op'éel xook ma' tu ya'alajo'ob u fuente NaHS utilizado ti' u métodos preparación17,18,24,25,26. NaHS jump'éel molécula hidratada yéetel u contenido ja' hidratación je'el u páajtal u variar, ku afecta le cantidad NaHS k'a'abeto'ob utia'al u preparar jump'éel solución jump'éel molaridad dada. Je'ebix, le contenido NaHS ti' k xook bin NaHS•1.3 H2O. Beyo', le concentraciones xíimbal tumen u NaHS ti' le k'iino'oba' xook páajtal u asab bajas u le reportadas.
"Bix je'el u páajtal u yaantal jump'éel compuesto bey corto kuxtal jump'éel efecto bey chowak ku bisik?" Pozgay et al.21 tu beetaj le k'áat chi'o' le ken u evaluar le táanil NaHS ti' le colitis ti' ch'o'obo'. Ku páa'tiko'ob u le xook ku taal u k'iini' yaan u páajtal u núukik le k'áat chi'o' yéetel u especular u soluciones NaHS páajtal yaantal polisulfuros asab estables Beyxan ti' kaambalilo'ob le H2S yéetel disulfuros ku median le efecto NaHS21. Uláak' posibilidad jach u concentraciones jach bajas u NaHS restante ti' solución xan je'el u páajtal u yaantal jump'éel efecto beneficioso. U jaajile', Olson et al. tu ts'áaj pruebas ti' le niveles micromolares ti' H2S ti' k'i'ik'el ma' le fisiológicos yéetel k'a'abéet yaantal ti' le rango nanomolar wa ausente tu láakal13. H2S je'el u páajtal u meyaj yo'osal le sulfatación proteínas, jump'éel modificación post-translacional reversible ku afecta le función, estabilidad yéetel localización ya'ab proteínas52,53,54. U jaajile', yáanal condiciones fisiológicas, yan 10% u 25% ti' ya'ab proteínas hepáticas ku sulfiladas53. Ambas xook reconocen le rápida destrucción u NaHS19,23 Ba'ale' sorprendentemente afirman u "controlamos le concentración NaHS ti' ja' potable reemplazando Sáansamal."23 jump'éel xook accidentalmente afirmó u "NaHS jach jump'éel donante H2S estándar yéetel u meyajtiko'ob comúnmente ti' le práctica clínica utia'al u reemplazar H2S yan wéet."18
Le tsikbal yaan ka'analo' ku ye'esik u NaHS ku sa'atal ti' le solución yo'osal le volatilización, oxidación yéetel fotolisis, ka tune' yaan sugerencias ku beetiko'ob utia'al xu'ulsiko'ob u asab H2S ti' le solución. Yáax, u evaporación H2S yaantal yo'osal u interfaz gas-líquido13 yéetel le pH le solución11; le beetike', uti'al u xu'ulul le asab evaporativao', u kaal le botella ja'o' je'el u meentik u chan je'el bixake' páajtal je'el bix u ya'ala'al ka'ache'15,19, yéetel u pH le ja'o' je'el u páajtal u ajustar u ti' jump'éel límite superior aceptable (es decir, 6.5-8.551) utia'al u minimizar le asab evaporativa11. Tu ka' kúuchil, le oxidación espontánea ti' H2S ku yúuchul debido a le táanil le oxígeno yéetel u yaantal iones metales transición ti' le ja'o' potable13, bey u desoxigenación le ja'o' potable yéetel argón wa nitrógeno44,45 yéetel u búukinta'al queladores metales37,47 je'el xu'ulsiko'ob le oxidación sulfuros. Tu yóoxp'éel, uti'al ma' u yantal fotodescomposición ti' H2S, le chúujo'ob ja'o' je'el u páajtal u envueltos yéetel ju'un aluminio; Le ba'ala' xan ku meyaj ti' materiales sensibles ti' le sáasilo' bey estreptozotocin55. Tu ts'ooke', le sales sulfuro inorgánicos (NaHS, Na2S, yéetel CaS) ku páajtal ts'aik yo'osal gavage kúuchil u disolver ti' ja' potable bey reported ka'ache'56,57,58; xook ts'o'ok u demostrado u sulfuro sodio radiactivo administrado yo'osal gavage ti' ratas jach ma'alob absorbido yéetel distribuido ti' prácticamente tuláakal le tejidos59. Tak bejla'e', óol tuláakal le máasewáalo'obo' ti' le xook ts'o'ok u administrado sales sulfuro inorgánicos intraperitonealmente; kex beyo', le bejo' ma'atech u meyaj ti' le configuración clínica60. Ba'axten otra parte, le bejo' oral jach le bejo' asab común yéetel preferido u administración ti' humanos61. Le o'olale', k recomienda evaluar le táanil le donantes H2S ti' roedores tumen gavage oral.
jump'éel limitación jach u medimos sulfuro ti' solución acuosa yéetel suero utilizando le método MB. Le métodos utia'al u P'iis sulfuro incluyen titulación yodo, espectrofotometría, método electroquímico (potenciaometría, amperometría, método coulométrico yéetel método amperométrico) yéetel cromatografía (cromatografía gas yéetel cromatografía líquida u ka'anal rendimiento), ichil le ba'ax le método asab comúnmente utilizado jach le método espectrométrico MB26. jump'éel limitación ti' le método MB utia'al u P'iis H2S ti' muestras biológicas jach u P'iis tuláakal le compuestos ku ya'alik azufre yéetel ma' libre H2S63 tuméen ku beeta'al yáanal condiciones ácidas, ku resulta ti' le extracción azufre ti' le fuente biológica64. Ba'ale', je'el bix u ya'alik le Asociación Americana de Salud Pública, MB leti' le método estándar uti'al u p'iis le sulfuro ti' water65. Le o'olale', le limitación ma' afecta k k'ajle' ya'ala'al máaxo'ob máano'ob yóok'ol le inestabilidad soluciones ku ya'alik NaHS. Beyxan, ti' k xook, le recuperación mediciones sulfuro ti' muestras ja' yéetel suero ku ya'alik NaHS bin 91% yéetel 93%, respectivamente. Le k'iino'oba' valores táan ti' consonancia yéetel le rangos reportados ka'ache' (77-92)66, indicando precisión analítica aceptable42. K'a'ana'an u ya'ala'ale' utilizamos ratas masculinas yéetel femeninas de acuerdo con le directrices le Institutos Nacionales ti' Salud (NIH) utia'al Jech le sobredependencia ti' xook ba'alche'ob chéen masculinos ti' xook preclínicos67 yéetel utia'al incluir ratas masculinas yéetel femeninas siempre u páajtal68. Le ch'aaj ts'o'ok u enfatizado tumen láak'o'ob69,70,71.
Ti' conclusión, ya'ala'al máaxo'ob máano'ob le xooko' indican u soluciones NaHS preparadas yéetel ja' potable ma' táan u béeytal u utilizadas utia'al u generar H2S debido a u inestabilidad. Le bejo' administración expondría ba'alche'ob ti' niveles inestables yéetel asab bajos u le esperados ti' NaHS; le beetike', le ba'ax kaxta'abo' ma' je'el u páajtal u meyaj ti' wíinik.
Le conjuntos datos utilizados yéetel leti' wa analizados ichil le xooko' actuales táan disponibles ti' le autor correspondiente ti' le j-na'akij razonable.
Szabo, K. K'iinil u investigación le sulfuro hidrógeno (H2S): u toxina ambiental u mediador biológico. Bioquímica yéetel Farmacología 149, 5-19. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2017.09.010 (2018).
Abe, K. yéetel Kimura, H. Je'el u páajtal u meyaj le sulfuro de hidrógeno bey juntúul neuromodulador endógeno. Journal of Neuroscience, 16, 1066–1071. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.16-03-01066.1996 (1996).
Chirino, G., Szabo, C. yéetel Papapetropoulos, A. Ju'un fisiológico ti' le sulfuro hidrógeno ti' células, tejidos yéetel órganos mamíferos. Reseñas ti' fisiología yéetel biología molecular 103, 31-276. https://doi.org/10.1152/physrev.00028.2021 (2023).
Dillon, KM, Carrazzone, RJ, Matson, JB, yéetel Kashfi, K. Promesa evolutiva ti' le kaambalilo'ob k'u'ubul celular utia'al u óxido nítrico yéetel sulfuro hidrógeno: jump'éel túumben época u ts'aak personalizada. Bioquímica yéetel Farmacología 176, 113931. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2020.113931 (2020).
Sun, X., et al. U ts'a'abal ya'ab k'iin ti' jump'éel donante sulfuro hidrógeno u liberación chaanbelil je'el u páajtal u Je'e bix u páajtale' le loobo' isquemia leti' reperfusión miocárdica. Informes científicos 7, 3541. https://doi.org/10.1038/s41598-017-03941-0 (2017).
Sitdikova, GF, Fuchs, R., Kainz, W., Weiger, TM yéetel Hermann, A. Le fosforilación ti' le beel BK regula le sensibilidad ti' le sulfuro hidrógeno (H2S). Frontiers in Physiology 5, 431. https://doi.org/10.3389/fphys.2014.00431 (2014).
Sitdikova, GF, Weiger, TM yéetel Hermann, A. Sulfuro de hidrógeno mejora le actividad canal potasio activado tumen calcio (BK) ti' le células tumorales pituitarias u rata. Archit. Pfluegers. 459, 389–397. https://doi.org/10.1007/s00424-009-0737-0 (2010).
Jeddy, S., yéetel u láak'o'ob. Le sulfuro hidrógeno ku yáantik u kanáanta'al le nitrito xu'ullsa'al le loobo' isquemia-reperfusión miocárdica ti' ratas diabéticas bin yano'ob 2. Óxido nítrico 124, 15-23. https://doi.org/10.1016/j.niox.2022.04.004 (2022).
Corvino, A., et al. Tendencias ti' le química donantes H2S yéetel u impacto ti' le k'oja'anil cardiovascular. Antioxidantes 10, 429. https://doi.org/10.3390/antiox10030429 (2021).
DeLeon, ER, Stoy, GF, yéetel Olson, KR (2012). Pérdidas pasivas ti' sulfuro hidrógeno ti' experimentos biológicos. Bioquímica analítica 421, 203-207. https://doi.org/10.1016/j.ab.2011.10.016 (2012).
Nagy, P., et al. Aspectos químicos ti' le mediciones sulfuro hidrógeno ti' le muestras fisiológicas. Bioquímica et Biophysical Acta 1840, 876–891. https://doi.org/10.1016/j.bbagen.2013.05.037 (2014).
Kline, LL.D. Determinación espectrofotométrica ti' le sulfuro hidrógeno ti' ja'ilo'ob ku yúuchul. Limnol. Oceanogr. 14, 454–458. https://doi.org/10.4319/lo.1969.14.3.0454 (1969).
Olson, KR (2012). Kaambalil yo'osal u química yéetel biología le sulfuro hidrógeno. "Antioxidantes" Señalización Redox. 17, 32–44. https://doi.org/10.1089/ars.2011.4401 (2012).